Práctica: SIEMBRA DE BACTERIAS Y ACTINOBACTERIAS Fecha 01/10/2019
Elaboró:
García López Mayte
Valenzuela Guzmán María del Pilar
Resultados
Parte 1: Esterilización y preparación de medios de cultivo
Se preparó diferentes medios de cultivo: dos medios sólidos, tres semisólidos, y para comprobar si se pueden utilizar se realizó un control de calidad.
Figura 1. Indicadores biológicos autocontenidos.
Parte 2: Siembra de bacterias
A partir de un cultivo de Bacillus subtilis se inoculó en los medios de cultivos preparados con anterioridad, mediante diferentes técnicas. En la Tabla 1 se muestran los resultados de crecimiento en los diferentes medios de cultivo y de la tinción de Gram que se realizó.
Tabla 1. Características microscópicas y de crecimiento en medios líquidos, semisólidos y sólidos, inoculados mediante diferentes técnicas.
FIGURA 1 y 2. Sembrado en placa por estría radial.
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FIGURA 3. Medios líquidos inoculados. FIGURA 4. Sedimento en medio líquido.
FIGURA 5. Medio semisólido inoculado por picadura.
FIGURA 6. Medio semisólido inoculando con pipeta.
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FIGURA 7. Agar inclinado: estría recta. FIGURA 8. Agar inclinado: estría ondulada.
TINCIONES DE GRAM:
FIGURA 3. Suspensión de Bacillus s.p. FIGURA 4. Colonia de Bacillus s.p.
Parte 3: Siembra de actinobacteria
Tabla 2. Características coloniales y microscópicas del desarrollo de actinobacterias.
FIGURA 5. Sembrado en placa por estría radial de Streptomyces erytheus.
TINCIÓN DE GRAM:
Figura 6 y 7. Tinción de gram de colonia de Streptomyces erytheus.
Conclusión
Parte 1: Esterilización y preparación de medios de cultivo
En la figura 1, se muestran los indicadores biológicos autocontenidos, uno sin esterilizar (izquierda) y uno esterilizado. Se puede concluir que los medios preparados si se pueden utilizar para inocular, esto se debe a que el indicador biológico esterilizado no cambio de color, lo cual verifica el proceso de esterilización.
Parte 2: Siembra de bacterias.
El género Bacillus, pertenece a la familia Bacillaceae, una de las familias bacterianas con mayor actividad bioquímica. Son bacilos aerobios y anaerobios facultativos, gram positivos, producen endosporas con morfología oval o cilíndrica que le permite resistir condiciones desfavorables en el ambiente, son móviles por la presencia de flagelos laterales, son catalasa positiva, presentando hemólisis variable y un crecimiento activo en un rango de pH entre 5.5 - 8.5. La propagación activa del microorganismo se produce en medios que presentan superficie húmeda. Las células en crecimiento no se propagan fácilmente en medios líquidos. Estos microorganismos por lo general crecen bien en agar sangre, produciendo colonias blanquecinas, grandes, extendidas e irregulares. [1] La habilidad de las especies de Bacillus de formar endosporas altamente resistentes les da una ventaja competitiva muy importante en un ambiente como el suelo. [2]
Bacillus subtilis crece en el rango de temperatura mesofílica y ha desarrollado un conjunto de estrategias que permiten la supervivencia en estas duras condiciones, que es la formación de endosporas resistentes al estrés. Las colonia de Bacillus subtilis en TSA presentan características elevadas, opacas y arrugadas.[3]
Las colonias pueden ser de aspecto liso, mucoide o rugoso; los bordes pueden ser ondulados o extendidos en el medio y ocasionalmente dan la apariencia de cultivos mixtos. Son bacilos Gram positivos con bordes redondeados. Presentan esporas esféricas y centrales que no deforman el bacilo.[4]
Aunque no se logró obtener colonias aisladas de la siembra en medio TSA, se podía apreciar ciertas características coloniales de Bacillus subtilis: colonias grandes, circulares, blancas opacas, con borde crenado, una elevación rugosa y una textura butirosa, que de acuerdo a lo reportado por la literatura, estas características coinciden.
En el caldo inoculado con dos asadas, no hubo crecimiento en la superficie, ni presencia de turbidez, solo se mostró un sedimento grumoso, que podrían indicar, que Bacillus subtilis es anaerobio, pero en el medio semisólido (inoculado con pipeta) mostró crecimiento en la superficie y en el centro del tubo, lo que indica que es un microorganismo anaerobio facultativo, coincide con lo reportado en la bibliografía. En el medio semisólido (inoculado por picadura) no se aprecia movilidad a lo largo de la picadura, lo que indicaría que no es un microorganismo móvil. Sin embargo, no se puede asegurar ningún resultado debido a la mala inoculación que se hizo, obteniendo resultados no concluyentes.
En el agar semi-sólido inclinado, inoculado por estría recta, se presentó una forma de crecimiento equinulado.
En la tinción de Gram se observa que Bacillus subtilis es una bacteria con forma de bacilo y agrupación de estreptobacilos, al teñirse de color morado se concluye que es gram-positivo. Para ambas muestras, muestra de suspensión y muestra tomada de una colonia desarrollada, el resultado fue el mismo: bacteria gram-positiva con forma de bacilo y agrupación de estreptobacilos, lo cual corresponde a lo reportado en la bibliografía. Bacillus subtilis es un organismo modelo para estudiar la formación de endosporas en bacterias y en la tinción de Gram, realizada con la muestra tomada de una colonia, se logran observar endosporas, las cuales aparecen como espacios en blanco dentro de algunos de los bacilos, sin deformarlos.
Parte 3: Siembra de actinobacteria.
Streptomyces, del género de bacterias filamentosas de la familia Streptomycetaceae (orden Actinomycetales). Ciertas especies se destacan por la producción de antibióticos de amplio espectro, químicos que las bacterias producen naturalmente para matar o inhibir el crecimiento de otros microorganismos.
De acuerdo a la literatura, Streptomyces se caracterizan como bacteria aerobia gram-positiva de forma compleja. Forma una red filosa llamada micelio que lleva cadenas de esporas en la madurez. Sus hebras ramificadas tienen un diámetro de 0,5 a 1,0 micrómetros.[5] La mayoría forman estructuras filamentosas de diámetro muy pequeño, menor a 1 μm (micelio microsifonado), con un promedio de 0.2 a 0.8 μm, rectas, ondulantes, flexuosas y ramificadas (laterales o dicotómicas); algunas especies son tabicadas, aunque por el tamaño tan pequeño es difícil distinguir los septos en el microscopio óptico.
El crecimiento de los actinomicetos en medios sólidos es de colonias limitadas, algunas de tipo bacteriforme y otras rocosas, acuminadas, con finos filamentos o hifas nutritivas.[6]
Las colonias desarrolladas después de la siembra de Streptomyces erytheus, se observó un forma puntiforme con una elevación umbondada, estas colonias eran blanquecinas, tenían un aspecto y textura seca. Al realizar la tinción de Gram, con una muestra obtenida de una de las colonias desarrolladas en medio Sabouraud, se tiñó de color morado, concluyendo que es gram positivo, coincidiendo con lo informado en la bibliografia; de igual manera la forma observada en el microscopio corresponde con lo mencionado para las actinobacterias, ya que se observan micelios dispersos a en toda la muestra.
Bibliografía
[1] Layton, Cristian & Maldonado, Edna & Monroy, Luisa & MSC, Lucía & Sanchez, Ligia. (2011). Bacillus spp.; perspectiva de su efecto biocontrolador mediante antibiosis en cultivos afectados por fitopatógenos. Nova. 9. 177. 10.22490/24629448.501. Recuperado el 27 de septiembre de 2019 de la página web: https://www.researchgate.net/publication/316651571_Bacillus_spp_perspectiva_de_su_efecto_biocontrolador_mediante_antibiosis_en_cultivos_afectados_por_fitopatogenos
[2] Clavo, Pamela & Zuñiga, Doris. (2010). CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE CEPAS de Bacillus spp. AISLADAS DE LA RIZÓSFERA DE PAPA (Solanum tuberosum). Ecología Aplicada, 9(1), ISSN 1726-2216. Recuperado el 27 de septiembre de 2019 de la página web: http://www.scielo.org.pe/pdf/ecol/v9n1/a04v9n1.pdf
[3] MicrobeWiki. (2015). Bacillus Subtilis. Recuperado el 27 de septiembre de 2019 de la página web: https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Bacillus_subtilis
[4] Realpe, M. E., Hernández, C. A., & Agudelo, C. I. (2002). Especies del género Bacillus: morfología macroscópica y microscópica. Biomédica, 22(2), 106-9.Recuperado el 27 de septiembre de 2019 de la página web: https://doi.org/10.7705/biomedica.v22i2.1148
[5] The Editors of Encyclopaedia Britannica. (2018). Streptomyces. Encyclopædia Britannica, inc. Recuperada el 29 de septiembre de 2019 de la página web: https://www.britannica.com/science/Streptomyces
[6] Bonifaz, J. A., (2010). Micología médica básica. Capítulo 3. Propiedades generales de los actinomicetos. México: McGraw Hill.
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